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蛋白平臺│設備篇(三):相互作用分析

瀏覽次數(shù):3372次 發(fā)布時間:2016-06-29 【關閉】 字體:   

一、Biacore T200 相互作用儀

 

1)分析物以恒定流速和濃度流過芯片表面;

2)與固定在芯片表面上的另一生物分子(稱為:配體)發(fā)生相互作用;使芯片表面物質質量發(fā)生改變,引起折射率改變;

3)儀器記錄下響應值(response,RU)的改變;

4)進樣結束后,切換緩沖液流過芯片表面,分析物由配體上自發(fā)解離,解離的進程由響應值實時監(jiān)控。

相互作用過程演示

二、ITC200 等溫滴定量熱儀

二、ITC200 等溫滴定量熱儀

基于等溫滴定量熱技術(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)

測定生物分子反應熱,同時確定結合/解離平衡常數(shù)、反應化學量(n)、焓(ΔH)和熵(ΔS),以闡明分子相互作用的機制

                                                     ITC相互作用原理

1)微量熱儀中有兩個池,其中一個含有水,作為參比池,另一個含有樣品。參比池和樣品池被設定到所需的實驗溫度。


2)將裝有配體分子的滴定針插入包含目標蛋白的樣品池中并逐漸滴定注入;


3)當有配體與蛋白質結合,則可檢測到被吸收或是被釋放的熱量變化;


4)每一次滴定時,量熱儀測量被釋放或吸收的所有熱量,直到結合反應達到平衡。  測得的熱量與結合量成正比。

三、相互作用分析比較

 

 

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